产品货号:
KD0244
中文名称:
琼脂糖凝胶6FF ,BR
英文名称:
Sepharose 6FF
产品规格:
100mL|500mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
保存:2~8℃
琼脂糖凝胶6FF是用6%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒,作为凝胶层析介质使用。
性能参数:
*检测条件:层析柱10mm×300mm *柱床高5cm,25℃,流动相为0.1mol/LNaCl。
使用说明:
本产品为传统的琼脂糖介质,非特异性吸附低,回收率高,可多次重复使用等特点,用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。
优点:高化学和物理稳定性、快速流动特性、维护方便、可扩大规模。
1.装柱
(1)让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。
(2)根据柱子大小取所需量的凝胶,用去离子水清洗掉20%乙醇,用缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。
(3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。
(4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
(5)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。
2.平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。
建议使用离子强度为0.15或更大的缓冲液,以避免溶质分子和基质之间的任何不需要的离子相互作用。对于各Sepharose凝胶的推荐流速,请参考推荐流速越低,分离度越高。
3.上样
(1)样品用平衡液配制,样品一定要离心或过滤后上样。
(2)推荐的样品体积为总床体积的2~5%。
4.洗脱
用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
5.再生
一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。
在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。这些可以使用下述步骤清除。
出现下面这些情况,是必须需要清洗再生的:
(1)背压增加;
(2)色谱柱顶部的颜色变化;
(3)分辨率降低;
(4)转换接头和凝胶表面之间出现空隙。
如果观察到增加的背压,在开始柱清洁程序之前先检查管路中的各个过滤阀、过滤膜是否被污染;
通过用0.1M NaOH以推荐线性流速洗涤柱子,除去沉淀的蛋白质,非特异性结合的蛋白质和脂蛋白。
6.注意
在装柱、使用和保存柱子的时候,始终要避免柱子流干气泡进入。
保存:
使用完的填料,用纯水将盐分彻底冲洗,最后保存在20%乙醇中,4℃保存。
注意事项:
1.上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。
2.在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。
3.不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。
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